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      貓血支原體PCR檢測試劑盒說明書

      產(chǎn)品簡介

      貓血支原體PCR檢測試劑盒說明書
      上海聯(lián)祖生物相關(guān)產(chǎn)品:
      PON檢測試劑盒有些結(jié)合蛋白質(zhì)與有毒金屬和熱原質(zhì)相結(jié)合,能起到解毒作用

      更新時間:2021-03-13
      訪問次數(shù):649
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      組成及試劑配制:
      1、酶標(biāo)板:一塊(96孔)
      2、 標(biāo)準(zhǔn)品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復(fù)顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
      3、 樣品稀釋液:1×20ml。
      4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
      5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
      注意事項:1.基礎(chǔ)程序;2.?dāng)U增溫度和延伸溫度;3.反應(yīng)時間;4.循環(huán)次數(shù);5.PCR 反應(yīng)液的配制;6.PCR技術(shù)的基本原理;7.PCR的反應(yīng)動力學(xué);8.PCR擴(kuò)增產(chǎn)物;9.PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

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       產(chǎn)品名稱

       貓血支原體PCR檢測試劑盒說明書

       英文名稱

       Mycoplasma haemofelisPCR

       貨號

       LZP7031

      實驗過程:
      一、試劑準(zhǔn)備
      1. DNA模板
      2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
      3.10×PCR Buffer
      4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
      5.Taq酶
      二、操作步驟
      1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
      10×PCR buffer             5μl
      dNTP mixl                 4μl
      引物1(10pM)               2μl
      引物2(10PM)              2μl
      Taq酶(2U/μl)            1μl
      DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
      ddH2O至               50 μl
      PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
      2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
      3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
      4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
      三、注意事項
      1.PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個沒有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個的PCR實驗室。
      2.純化模板所選用的方法對污染的風(fēng)險有極大影響。一般而言,只要能夠得到可靠的結(jié)果,純化的方法越簡單越好。
      3.所有試劑都應(yīng)該沒有核酸和核酸酶的污染。操作過程中均應(yīng)戴手套。
      4.PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水,采用0.22μm濾膜過濾除菌或高壓滅菌。
      5.試劑都應(yīng)該以大體積配制,試驗一下是否滿意,然后分裝成僅夠一次使用的量儲存,從而確保實驗與實驗之間的連續(xù)性。
      6.試劑或樣品準(zhǔn)備過程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
      7.PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開,并且要充分混勻。檢測步驟:
      一、 試劑的準(zhǔn)備
      從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振蕩混勻后,10000rpm離心10s。
      設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對照+1管陽性對照),每個測試反應(yīng)體系配制如下表:
      試劑 每個反應(yīng)加入的量 N個反應(yīng)加入的量
      熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
      酶混合物 1 µL N×1 µL
      總量 15 µL N×15µL
      1) 計算好各試劑的使用量,加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中,充分混勻,10000rpm離心10s,向設(shè)定的N個PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液,向每管中加入處理后樣品或陰性對照(NTC)和陽性對照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬時離心10秒。
      7.2 qPCR反應(yīng)條件
      將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
      推薦循環(huán)條件:
      1循環(huán) 50℃ for 2 min
      預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
      PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
      60℃ for 60 sec
      60℃延伸時收集熒光信號。報告基團(tuán):設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán):NONE,請勿選擇ROX參比熒光。
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      香葉木素-7-O-β-D-葡萄糖苷Integrin alpha V/CD51 peptide  整合素αV抗原TRAF3/CD40bp  腫瘤壞死因子受體相關(guān)蛋白3抗體

      仙苷; 異鼠李素-3-O-β-D-蕓香糖苷J(rèn)AK1(Tyrosine-protein kinase JAK1; Janus kinase 1)  蛋白質(zhì)酪氨酸激酶JAK-1抗原TRAF1  腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子1抗體

      芍藥內(nèi)酯苷JAK2(Tyrosine-protein kinase JAK2; Janus kinase 2; JAK-2)  蛋白質(zhì)酪氨酸激酶JAK-2抗原TRADD  腫瘤壞死因子受體1相關(guān)死亡域蛋白抗體

      phospho JAK2(phospho-Tyr1007+Tyr1008)  磷酸化蛋白酪氨酸激酶JAK-2抗原TRAC1/RNF125  環(huán)指蛋白125抗體

      白蠟樹素;涔皮素JNK1/3 (c-Jun ami-terminal kinase 1/3)  c-Jun氨基末端激酶1/3多肽抗原TRA16  激素受體相關(guān)蛋白16抗體

      環(huán)氧澤瀉烯phospho-JNK1/2/3(pThr183/pTyr185) peptide  磷酸化氨基末端激酶1/2/3(pJNK1/2/3)抗原TRA16  激素孤兒受體相關(guān)蛋白抗體

      N-甲基野靛堿Ki-67(Antigen identified by moclonal antibody Ki 67)  Ki-67 AntigenTPX2  微管相關(guān)同源蛋白TPX2抗體

      硫酸金雀花堿Klf4 (Kruppel likefactor 4)  腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子抗原TPTE  腫瘤/抗原44抗體

      百蕊草素I;山柰酚-3-葡萄糖鼠李糖苷;阿福豆苷phospho-KLF5/Krueppel-like factor 5 (pSer272)  磷酸化腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子5抗原TPST2  酪蛋白硫酸轉(zhuǎn)移酶2抗體
      貓血支原體PCR檢測試劑盒說明書α1微球蛋白/bikunin前體(AMBP)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:2~8℃100毫升

      α2巨球蛋白(α2-MG)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:100支/包

      α2抗纖溶酶(α2-AP)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:RT50支/包

      α2纖溶酶抑制物(α2-PI)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:25克

      αL艾杜糖苷酸酶(IDUA)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:2~8℃250毫克

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      αN已酰氨基葡糖苷酶(αNAG)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:RT,避光250克

      α半乳糖基抗體(Gal)ELISA試劑盒  *shēng huà shì jì  容量:2~8℃25毫升

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