注意事項(xiàng)：1．基礎(chǔ)程序；2．?dāng)U增溫度和延伸溫度；3．反應(yīng)時(shí)間；4．循環(huán)次數(shù)；5．PCR 反應(yīng)液的配制；6．PCR技術(shù)的基本原理；7．PCR的反應(yīng)動(dòng)力學(xué)；8．PCR擴(kuò)增產(chǎn)物；9．PCR反應(yīng)體系與反應(yīng)條件。

組成及試劑配制:
1、酶標(biāo)板：一塊（96孔）
2、 標(biāo)準(zhǔn)品（凍干品）： 2瓶，請(qǐng)臨用前15分鐘內(nèi)配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml，蓋好后室溫靜置大約10分鐘，同時(shí)反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為200 U/L，然后做系列倍比稀釋（注：不要直接在板中進(jìn)行倍比稀釋），分別配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標(biāo)準(zhǔn)品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述標(biāo)準(zhǔn)品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液：1×20ml。
4、 檢測(cè)稀釋液A：1×10ml。
5、 檢測(cè)稀釋液B：1×10ml。
?
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
三、注意事項(xiàng)
１．PCR反應(yīng)應(yīng)該在一個(gè)沒(méi)有DNA污染的干凈環(huán)境中進(jìn)行設(shè)立一個(gè)的PCR實(shí)驗(yàn)室。
２．純化模板所選用的方法對(duì)污染的風(fēng)險(xiǎn)有極大影響。一般而言，只要能夠得到可靠的結(jié)果，純化的方法越簡(jiǎn)單越好。
３．所有試劑都應(yīng)該沒(méi)有核酸和核酸酶的污染。操作過(guò)程中均應(yīng)戴手套。
４．PCR試劑配制應(yīng)使用zui高質(zhì)量的新鮮雙蒸水，采用0.22μm濾膜過(guò)濾除菌或高壓滅菌。
５．試劑都應(yīng)該以大體積配制，試驗(yàn)一下是否滿意，然后分裝成僅夠一次使用的量?jī)?chǔ)存，從而確保實(shí)驗(yàn)與實(shí)驗(yàn)之間的連續(xù)性。
６．試劑或樣品準(zhǔn)備過(guò)程中都要使用一次性滅菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿應(yīng)洗滌干凈并高壓滅菌。
７．PCR的樣品應(yīng)在冰浴上化開(kāi)，并且要充分混勻。
高藜蘆酸(標(biāo)準(zhǔn)品)C37H42N2O6(S,S)-(+)-2,二甲氧基-1,雙(二甲氨基)丁烷

PD0325901C31H46O5碳酸肼

西他塞坦鈉/司他生坦鈉C9H12O32,2'-雙(2-)-4,4',5,5'-四基-1,2'-聯(lián)咪唑[光聚合引發(fā)劑]

西他塞坦鈉/司他生坦鈉C21H20NO6.Cl5'--羥基-2'-甲基-2-萘

西他塞坦鈉/司他生坦鈉C27H34O12呋喃酮酸酯

輪環(huán)藤寧四酸/1,4,7,10-四氮雜環(huán)十二烷-1,4,7,10-四酸C8H8O3(+)-二酰基-D-

拉米夫定C8H8O3磺酸酐

拉米夫定(標(biāo)準(zhǔn)品)C6H6O3Nα-[(9H-芴-9-氧基)羰基]-L-蘇氨酸叔丁酯

鹽酸三氟拉C11H10O4α-基肉桂酸酯

鹽酸三氟拉(標(biāo)準(zhǔn)品)C11H14O41--2,5-二氧基

皮質(zhì)甾酮/腎上腺酮C30H30O8甲酰基-β-氨酸

皮質(zhì)甾酮(標(biāo)準(zhǔn)品)C42H70O122,6-二并噻唑

二硫化四基秋蘭姆C10H8O33,5-二氟甲

雙硫侖(標(biāo)準(zhǔn)品)C7H8O2基化鎂

楊梅素/楊梅酮C11H10O3(R)-哌-2-羧酸

楊梅素/楊梅酮（標(biāo)準(zhǔn)品）C8H15NO2氨甲酰基-5-氟基酸

去氧膽酸C44H58O5酸鎘

β-環(huán)糊精C30H46O3氨基-2,5-二酚

白介素1受體相關(guān)激酶1(IRAK1)ELISA試劑盒phospho-c-Jun/AP-1(Thr91+Thr93)  酸化原癌基因c-Jun500 ul

白介素1受體拮抗劑(IL1Ra/CD121)ELISA試劑盒phospho-c-Jun (Ser73)  酸化原癌基因c-Jun1 Pack

白介素1可溶性受體Ⅱ(IL-1sRⅡ)ELISA試劑盒phospho-c-Jun (Ser243)  酸化原癌基因c-Jun300 ul

白介素1可溶性受體Ⅰ(IL-1sRⅠ)ELISA試劑盒phospho-c-Jun (Thr93)  酸化原癌基因c-Jun300 units

白介素1β前體(pro-IL1B)ELISA試劑盒phospho-c-Jun (Ser63)  酸化原癌基因c-Jun1 Kit

白介素1β(IL-1β)ELISA試劑盒Jun B  活化蛋白激酶B100 ul

白介素1α(IL-1α)ELISA試劑盒Jun D  活化蛋白激酶D100 ul

白介素18結(jié)合蛋白(IL-18BP)ELISA試劑盒CK I alpha/STK  屬絲/蘇氨酸蛋白質(zhì)激酶100 ul

白介素18(IL-18)ELISA試劑盒CK II Alpha/STK  屬絲/蘇氨酸蛋白質(zhì)激酶100 ul
藍(lán)舌病毒PCR檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)補(bǔ)體C4a+C4b蛋白抗體Ginseside F1中文名：人參皂苷F1別名：分子式：C36H62O9

少突膠質(zhì)細(xì)胞跨膜蛋白抗體Ginseside F2中文名：人參皂苷F2別名：分子式：C42H72O13

6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框140抗體Ginseside Rb2中文名：人參皂苷Rb2別名：分子式：C53H90O22

L型鈣通道蛋白抗體Ginseside CK中文名：人參皂苷CK別名：分子式：C36H62O8

電壓依賴性鈣通道Cav3.1抗體Lucidadiol中文名：別名：分子式：C30H48O3
檢測(cè)步驟：
一、 試劑的準(zhǔn)備
從試劑盒中取出熒光PCR反應(yīng)液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振蕩混勻后，10000rpm離心10s。
設(shè)所需要的PCR反應(yīng)管管數(shù)為N(N=樣本數(shù)+1管陰性對(duì)照+1管陽(yáng)性對(duì)照)，每個(gè)測(cè)試反應(yīng)體系配制如下表：
試劑 每個(gè)反應(yīng)加入的量 N個(gè)反應(yīng)加入的量
熒光PCR反應(yīng)液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
總量 15 µL N×15µL
（1） 計(jì)算好各試劑的使用量，加入一適當(dāng)體積潔凈離心管中，充分混勻，10000rpm離心10s，向設(shè)定的N個(gè)PCR反應(yīng)管中分別加入15μL熒光PCR反應(yīng)液，向每管中加入處理后樣品或陰性對(duì)照(NTC)和陽(yáng)性對(duì)照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬時(shí)離心10秒。
7.2 qPCR反應(yīng)條件
將各反應(yīng)管放入定量PCR儀器的反應(yīng)槽內(nèi)。
推薦循環(huán)條件:
1循環(huán) 50℃ for 2 min
預(yù)變性 1循環(huán) 95℃ for 10 min
PCR擴(kuò)增 40循環(huán) 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸時(shí)收集熒光信號(hào)。報(bào)告基團(tuán)：設(shè)置為FAM。淬滅基團(tuán)：NONE，請(qǐng)勿選擇ROX參比熒光。